Nota: La preparación de células electro-competentes se basa en el Protocolo 26 para 1.0 L de cultivo que se puede reducir a un volumen más pequeño (es decir, 250 ml). Tenga en cuenta que este protocolo se puede usar para hacer que todas las cepas competentes que se describan en este manuscrito para facilitar la FCA.22
Las cepas bacterianas que se emplean en los diversos análisis de complementación funcional se enumeran en la Tabla 2.
El doble mutante de E. coli AOH1 (ΔDAPD :: KAN2, DAPE6) alberga una mutación en el gen de la dAPE y una deleción completa del gen DAPD (Figura 1). Como tal, el mutante no puede crecer a menos que se proporcione DAP. Debido a estas mutaciones, AOH1 se considera auxotrófico. AOH1 es adecuado para el análisis de complementación funcional de L, L-diaminopimelato aminotransferasa (DAPL) ortólogos como DAPL cataliza la síntesis de L, L-diaminopimelato directamente de THDP para facilitar la síntesis de PG y Lys (Figura 1).
Los resultados del experimento deberían mostrar que solo los DAPL de expresión de Mutante AOH1 pueden crecer en medios L-DAP sin L-DAP, lo que demuestra que las enzimas recombinantes pueden convertir THDP a L, L-DAP eludiendo el DAPD y los pasos enzimáticos de la dapa La vía DAP/LYS (Figura 5).
El meso-diaminopimelato (M-DAP) es el aminoácido de reticulación en el PG de bacterias gramnegativas. La enzima UDP-N-acetilmuramoylalanil-D-glutamil-2,6-meso-diaminopimelato ligasa (Mure) facilita la adición de M-DAP en este proceso (Figura 3A-B). El mutante E. coli TKL-11 alberga una mutación en el gen Mure que resulta en la capacidad del mutante para crecer a 42 ° C debido al hecho de que la enzima mutada no puede doblar adecuadamente a esta temperatura.
Los resultados demostrarán que hay un crecimiento a la temperatura permisiva de 30 ° C tanto por el control como por el experimento. Sin embargo, solo las células que expresan Mure (experimento) podrán crecer a la temperatura no permisiva de 42 ° C (Figura 6).
¿Cuáles son las preguntas de complementación?
Se aisló un nuevo mutante auxotrófico proline (pro-53). Al construir cepas diploides parciales, se construyó una tabla de complementación como se muestra a continuación. Se muestra una copia de los genes en la parte superior de la tabla y la otra copia de los genes se muestra en un lado de la tabla. Solo los genes mutantes se muestran en la tabla. «-» indica la falta de complemento y «+» indica complementación. (Tenga en cuenta que una mutación ProA no puede complementar otra proautación, una mutación PARB no puede complementar otra mutación Prob y una mutación PROC no puede complementar otra mutación PROC). ¿Qué gen afecta la mutación pro-53?
Prob ProA Proc Prob - + + PROA + - + Proc + + - Pro -53 + - +Respuesta: La mutación pro-53 no puede complementar un mutante proa pero complementa un mutante prob y un mutante de proc, indicando que pro-53 afecta el gen proa.
Se aislaron una colección de mutantes de fago T4 que no pudieron lisse E. coli. La siguiente tabla muestra los resultados de los experimentos de coinfección con pares de estos mutantes T4 (+ indica que el punto que contiene los dos fagos se lisó).
- ¿Cuántos grupos de complementación diferentes hay?
Respuesta: Hay al menos 2 grupos de complementación.
- ¿Cuántos grupos de complementación diferentes hay?
¿Qué son los reactivos de complementación?
Eurofins Discoverx, una innovadora compañía de biotecnología, desarrolla, fabrica y comercializa reactivos, kits de ensayo completos y soluciones llave en mano para los mercados de descubrimiento, detección y ciencias de la vida. Nuestros productos, ensayos bioquímicos y basados en células, permiten a los clientes mejorar la productividad y la efectividad de la investigación, acelerando así el descubrimiento y el desarrollo de nuevos medicamentos.
La tecnología de tecnología de complementación de enzimas patentadas (EFC) de Eurofins Discoverx ofrece al descubrimiento de fármacos los medios para interrogar las reacciones biomoleculares para avanzar en los programas de detección y desarrollo de medicamentos terapéuticos. EFC es un sistema de ensayo de detección homogéneo que le permite medir y clasificar las potencias del ligando, descubrir el mecanismo de acción (MOA), realizar pantallas de unión y funcionales, identificar compuestos novedosos y mucho más. Como una tecnología de ensayo robusta y confiable, se puede utilizar EFC tanto para los formatos de ensayo basados en células (Pathhunter®, Kilr® e Incell) como para los formatos de ensayo bioquímico (plataforma HitHunter®).
EFC se basa en dos fragmentos enzimáticos de β-galactosidasa recombinantes (β-GAL) que actúan como un aceptador de enzimas (EA) y un donante de enzimas (ED). Por separado, los fragmentos están inactivos, pero combinados, forman una enzima activa que hidroliza su sustrato para producir una señal de quimioluminiscencia.
¿Qué son las preguntas libres?
Las preguntas de respuesta gratuita o las preguntas de ensayo son un tipo de pregunta abierta comúnmente utilizada en las escuelas para evaluar el aprendizaje de los estudiantes, así como en los exámenes de ingreso y, a veces, como parte de la aplicación de empleo o los procesos de detección.
Las preguntas de respuesta gratuita requieren que los examinados respondan a una pregunta o un mensaje abierto con una respuesta en prosa. Además de ser calificado para la corrección objetiva, las preguntas de respuesta gratuita también se pueden calificar por persuasión, estilo y dominio demostrado del material de sujeto. Las preguntas de respuesta gratuita son una parte común de las pruebas de evaluación en las escuelas, además de ser parte de las pruebas estandarizadas [1] Las preguntas de ensayo también a veces también se incluyen como parte de una entrevista de trabajo [2] o un proceso de solicitud escolar. [3]
Las preguntas de respuesta gratuita generalmente requieren poco trabajo para que los instructores escriban, pero pueden ser difíciles de calificar de manera consistente, ya que requieren juicios subjetivos. Las pruebas de respuesta gratuita son una prueba relativamente efectiva de razonamiento de nivel superior, ya que el formato requiere que los examinados proporcionen más de su razonamiento en la respuesta que las preguntas de opción múltiple. [4] Sin embargo, los estudiantes informan niveles más altos de ansiedad al tomar preguntas de ensayo en comparación con los exámenes de respuesta a corto o múltiples. [5]
¿Qué son los reactivos de respuesta corta?
El reactivo limitante (o reactivo limitante o agente limitante) en una reacción química es un reactivo que se consume totalmente cuando se completa la reacción química. [1] [2] La cantidad de producto formado está limitada por este reactivo, ya que la reacción no puede continuar sin él. Si uno o más otros reactivos están presentes en exceso de las cantidades necesarias para reaccionar con el reactivo limitante, se describen como reactivos excesivos o reactivos excesivos (a veces abreviados como «XS»).
El reactivo limitante debe identificarse para calcular el rendimiento porcentual de una reacción ya que el rendimiento teórico se define como la cantidad de producto obtenido cuando el reactivo limitante reacciona por completo. Dada la ecuación química equilibrada, que describe la reacción, hay varias formas equivalentes de identificar el reactivo limitante y evaluar las cantidades excesivas de otros reactivos.
Este método es más útil cuando solo hay dos reactivos. Se elige un reactivo (a), y la ecuación química equilibrada se usa para determinar la cantidad del otro reactivo (b) necesario para reaccionar con A. Si la cantidad de B realmente presente excede la cantidad requerida, entonces B está en exceso y en exceso y A es el reactivo limitante. Si la cantidad de B presente es menor de lo requerido, entonces B es el reactivo limitante.
Dado que la relación real es mayor de lo requerido, O2 es el reactivo en exceso, lo que confirma que el benceno es el reactivo limitante.
En este método, la ecuación química se usa para calcular la cantidad de un producto que se puede formar a partir de cada reactivo en la cantidad presente. El reactivo limitante es el que puede formar la menor cantidad del producto considerado. Este método se puede extender a cualquier número de reactivos más fácilmente que el primer método.
¿Qué es un reactivo de completamiento?
- Calcule cuánto producto se producirá a partir del reactivo limitante.
- Calcule cuántos reactivos quedan cuando se completa la reacción.
Una suposición adicional que hemos hecho sobre las reacciones químicas, además de la suposición de que las reacciones proceden hasta la finalización, es que todos los reactivos están presentes en las cantidades adecuadas para reaccionar a los productos. Este no es siempre el caso.
Considere la Figura 5.1 «Hacer agua». Aquí estamos tomando átomos de hidrógeno y átomos de oxígeno (izquierda) para hacer moléculas de agua (derecha). Sin embargo, no hay suficientes átomos de oxígeno para usar todos los átomos de hidrógeno. Nos quedamos sin átomos de oxígeno y no podemos hacer más moléculas de agua, por lo que el proceso se detiene cuando nos quedamos sin átomos de oxígeno.
Existe una situación similar para muchas reacciones químicas: generalmente se queda sin un reactivo antes de que todo el otro reactivo haya reaccionado. El reactivo que te quedas se llama el; Se considera que el otro reactivo o reactivos están en exceso. Una habilidad crucial para evaluar las condiciones de un proceso químico es determinar qué reactivo es el reactivo limitante y cuál es excesivo.
La clave para reconocer qué reactivo es el reactivo limitante se basa en un cálculo de masa molar o masa de masa: cualquier reactivo que brinde la menor cantidad de producto es el reactivo limitante. Lo que debemos hacer es determinar una cantidad de un producto (ya sea moles o masa) suponiendo que todo reactante reaccione. Cualquiera que sea el reactivo que brinde la menor cantidad de ese producto en particular es el reactivo limitante. No importa qué producto usamos, siempre que usemos el mismo cada vez. No importa si determinamos el número de lunares o gramos de ese producto; Sin embargo, veremos en breve que conocer la masa final de producto puede ser útil.
Supongamos que comenzamos una reacción con 50.0 g de AS y 50.0 g de O2. ¿Cuál es el reactivo limitante? Necesitamos realizar dos cálculos de masa molar, cada uno suponiendo que cada reactivo reaccione por completo. Luego comparamos la cantidad del producto producido por cada uno y determinamos cuál es menor.
¿Qué son las preguntas restringidas?
Las preguntas que no puede hacer en una entrevista son aquellas que entran en el estado protegido o los derechos de privacidad de un solicitante. Por ejemplo, los trabajadores mayores de 40 años están protegidos por la ley de discriminación por edad. Por lo tanto, no puede preguntar la edad de un solicitante, incluso si su apariencia o la fecha de graduación en su currículum la regalan. Tampoco puede hacer comentarios o tomar notas que indiquen la edad general o estimada de un solicitante.
Si se desliza y hace una pregunta inapropiada, se expone a posibles acciones legales si un solicitante tiene motivos para creer que su pregunta fue la base de una decisión de contratación discriminatoria. En ese momento o, incluso mejor, antes de llegar a ese punto, es vital comunicarse con su asesor corporativo para obtener orientación.
Los solicitantes a veces ofrecen cierta información como voluntarios (ya sea que estén casados o tengan hijos, por ejemplo) que no puede solicitar directamente. Si no pidió esas divulgaciones, no se preocupe. Aún así, querrá evitar incluso la apariencia de dicha información que se utiliza como parte de su decisión de contratación.
Algunas jurisdicciones estatales y locales proporcionan prohibiciones adicionales sobre las preguntas de la entrevista que no están necesariamente restringidas según la ley federal. Sin embargo, las siguientes preguntas de la entrevista probablemente serían ilegales en todos los estados (en algunos casos, si una pregunta de la entrevista es ilegal o no puede depender del tamaño del empleador y otros factores):
La Ley de Americanos con Discapacidades (ADA) brinda protecciones para empleados discapacitados y solicitantes de empleo. Si un solicitante tiene una discapacidad obvia (es decir, está en una silla de ruedas) o le ha revelado una discapacidad, puede preguntar sobre cualquier adaptación razonable que puedan necesitar para hacer el trabajo.
¿Qué es una pregunta restringida?
Una tarea de desempeño de evaluación de respuesta restringida es una herramienta de enseñanza. Las corporaciones y algunas empresas más pequeñas usan esto específicamente para capacitar a nuevos empleados o habilidades de actualización. Las herramientas de evaluación para la capacitación corporativa varían dependiendo de que la posición esté capacitada y el enfoque de la oficina. Algunas oficinas y departamentos son más especializados que otros. Un enfoque de «respuesta restringida» es la herramienta de enseñanza más simple, y generalmente es una respuesta corta o una pregunta de estilo en blanco.
Una tarea de evaluación está restringida en su respuesta si es altamente específica y, en general, contiene solo una respuesta correcta, explica la Universidad de Delaware. Los ejemplos típicos pueden ser una opción múltiple o un tipo de pregunta verdadero-falso. Los estilos más activos de la tarea serían una respuesta de emergencia en una fábrica.
En ese caso, los trabajadores de la fábrica serían perforados para ver si conocen la respuesta adecuada para diferentes emergencias. Luego se organizaría un ejercicio y la respuesta a una emergencia evaluada. Esta es una respuesta restringida en que hay un solo procedimiento adecuado y un conjunto específico de acciones solicitadas.
Volver a capacitar a los trabajadores en el nuevo software es otro ejemplo de tarea restringida. Desde la aprobación de Oxley en 2002, las corporaciones necesitaban actualizar su software de contabilidad para aumentar la confiabilidad, los detalles y la amplitud de los informes corporativos y la contabilidad. Esto significa que todos los contadores, contralores y oficiales de finanzas deben estar capacitados en el software más nuevo y actualizado. En algunos casos, los abogados de la compañía especializados en divulgaciones financieras también se probarían en este conocimiento.
Normalmente se requiere una evaluación de ejecución simple aquí. Esto se convierte en una tarea altamente restringida porque los trabajadores deben demostrar que son capaces de usar bien el equipo. Esto está restringido porque hay un programa y una forma adecuada de usarlo. Una de las ventajas de las preguntas de respuesta restringida es que no están «abiertos», como lo sería un ensayo interpretativo.
¿Qué son las preguntas estandar?
Opción múltiple (seleccione una): esta es una pregunta de selección única de opción múltiple. Los botones de radio se utilizan para preguntas de tipo seleccionado único. La orientación de la opción de respuesta puede ser vertical (configuración predeterminada) u horizontal.
Opción múltiple (seleccione muchos): esta es una pregunta múltiple de opción múltiple. Las casillas de verificación se utilizan para múltiples preguntas de tipo seleccionado. La orientación de la opción de respuesta puede ser Vértica (configuración predeterminada) u horizontal.
Menú desplegable: Se utiliza el tipo de pregunta del menú desplegable cuando el número de opciones es más. Por ejemplo, desea que los usuarios seleccionen su país. En lugar de mostrar todas las opciones, simplemente podemos agregarlas en un menú desplegable.
Cuadro de comentarios: este es una pregunta de texto de texto abierto donde los usuarios pueden ingresar texto largo.
Texto de una sola fila: esta pregunta se usa para texto corto / texto de respuesta de una línea. Por ejemplo: nombre
Entrada numérica (Freeform): Esta pregunta se utiliza para la entrada numérica. Por ejemplo: número de teléfono
Dirección de correo electrónico: Esta pregunta se utiliza para direcciones de correo electrónico. Cuando se validan, solo se aceptarán direcciones de correo electrónico válidas.
Preguntas de matriz: una pregunta matriz es una serie de preguntas que comparten las mismas opciones de respuesta
Escalas de múltiples puntos (Matrix Single Select): esta pregunta se puede usar cuando necesitamos agrupar preguntas que tengan la misma escala de opción de respuesta. Los informes consolidados se pueden hacer en preguntas de matriz.
Presentación / encabezado: el tipo de pregunta de presentación / encabezado se usa solo para el propósito de visualización. No se espera una entrada del usuario.
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