La preparación de la muestra de ADN y ARN es uno de los aspectos más importantes de la optimización de la calidad y cantidad de material de ácido nucleico para la secuenciación de la próxima generación. La exquisita sensibilidad de estas tecnologías coloca nuevas demandas sobre todos los reactivos involucrados, incluidos los requeridos para el proceso de preparación de muestras aguas arriba, que se describe en la Figura 1. Durante la preparación de la muestra, el ADN genómico se corta en 150-800 fragmentos BP. Esto se puede hacer mediante nebulización, cizallamiento acústico o por tratamiento con enzimas. El ADN cortado por la nebulización o el cizallamiento acústico puede contener extremos que son incompatibles (voladizos de 3 ‘o 5´ y 3´-fosfatos o 5´-OH) con pasos de ligadura posteriores y, por lo tanto, deben repararse. En algunos casos, puede ser necesario convertir una mezcla de extremos heterogéneos en una población homogénea de fragmentos de ADN que terminan con fragmentos de ADN con 5´-fosfatos y 3´-OH. Además, si se requiere la cola de DA para la ligadura posterior, se debe agregar una humedad de 3´ a un fragmento contundente. Los adaptadores se ligan a fragmentos de cola final o de cola y se amplifica toda la biblioteca.
Debido a que la preparación de la muestra es una serie de reacciones coordinadas, cada paso debe ser lo más eficiente posible para maximizar el rendimiento y al mismo tiempo mantener la conveniencia y la rentabilidad. La eficiencia de la reparación final, la cola, la ligadura y la amplificación dependen de la pureza de las enzimas que realizan estos pasos.
Durante 35 años, New England Biolabs se ha comprometido a proporcionar enzimas que impulsan los avances en biología molecular. La amplitud de los productos NEB se basa en una base de enzimas centrales que se ha expandido para incluir enzimas con propiedades únicas, así como nuevas aplicaciones y combinaciones de enzimas existentes. De hecho, los científicos han utilizado con éxito reactivos NEB para la preparación de la muestra de material de ácido nucleico durante muchos años, y para satisfacer las demandas de nuestros clientes, NEB ofrece una amplia selección de reactivos que facilitan la preparación de la muestra de ADN (Figura 2). Además, NEB ha adoptado un enfoque dual para desarrollar productos para la preparación de la muestra:
- Ofrezca formulaciones adicionales de reactivos para una mayor facilidad de uso en aplicaciones específicas. Un ejemplo de este enfoque es el reactivo de preparación de muestra de ADN NebNext®, un conjunto de enzimas, nucleótidos y tampones ideales para la preparación de muestras para la secuenciación de próxima generación y la construcción de la biblioteca de expresiones.
¿Cómo hacer preguntas con reactivos ejemplos?
Soy un estudiante de investigación y tengo muchos problemas para encontrar los anticuerpos adecuados para mi estudio, porque necesito tanto monoclonal como policlonal. Y necesito comenzar a dirigirme a otros científicos internacionales. El problema es que no sé cómo abordar la situación. Si realmente tienen anticuerpos que necesito para mi trabajo, ¿cómo puedo pedirlos? ¿Las personas generalmente suministran sus anticuerpos para otros estudios «simplemente así»?
En primer lugar, la respuesta a su pregunta filosófica. La ciencia es un esfuerzo colaborativo. Si escribe sobre reactivos en un artículo, supone que la gente le pedirá que los compartan. Compartirlos también está en los intereses de los autores. Los solicitantes citarán su documento, confirmarán indirectamente sus hallazgos y difundirán su buena reputación, y la ciencia tiene que ver con la reputación. Usted es un estudiante de doctorado hoy, Postdoc mañana y un PI algún tiempo después, y es posible que necesiten su favor algún día.
Supongamos que encontró un artículo en el que los autores usan anticuerpos perfectos para su tarea. Asegúrese de que hayan hecho el reactivo y no lo pidieran de alguien, ya que no tendrán derecho a compartirlo.
Ahora sobre los aspectos prácticos. El artículo, donde encontró el anticuerpo, cita uno o más «autor correspondiente», generalmente con una dirección de correo electrónico. Eso es a quien escribes. Más de un escritor correspondiente significa que debe encontrar el más senior, que generalmente es el último autor.
Estimado apellido del profesor*, mi nombre es Ana Swartz, soy estudiante de investigación en la Universidad Y. He leído su excelente artículo ** «Título aquí» en el «Journal of X Science», donde usó anticuerpos x para proteína Y (o plásmido o línea celular). Estoy tratando de detectar la proteína Y en mis muestras usando Western Blot/ para complementar una expresión de mutación/ verificación en esta línea celular. Me pregunto si puedes compartir algo de tu reactivo. Estoy dispuesto a reembolsar sus gastos de envío, si es necesario. Sinceramente tuyo, Ana Swartz
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